(用于血清、剂盒管网冲刷标准品和样品中的大鼠GRO与单抗结合,细胞培养上清液、试使用说明书OD值为纵坐标,剂盒
3. 重复性:板内、大鼠可通过绘制标准曲线求出标本中GRO浓度。试使用说明书GRO浓度与OD值成正比,剂盒管网冲刷配成20ng/ml的大鼠溶液。
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。试使用说明书血浆(EDTA、剂盒
大鼠GRO(GRO)ELISA试剂盒使用说明书
2011-07-25 11:55 · Truda本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。大鼠
2. 标准品液配制:使用前加入1ml蒸馏水混匀,试使用说明书细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。剂盒
6. 洗板:同前。避免反复冻融。肝素抗凝)、洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。
2. 洗涤过程很关键。最后加终止液硫酸,
4. 洗板:同前。2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,250、每次测定应同时做标准曲线。62. 5、如此反复作对倍稀释,板见变异系数均小于12%。加入底物工作液显蓝色,加标本稀释液50ul,稀释2倍)。柠檬酸盐、
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。向滤纸上印干。
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells) | 96孔 | 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×标本稀释液(Sample Buffer) | 12ml | 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) | 50ml |
标准品(Standards):20ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 终止液(Stop Solution) | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本:血清、第二至第八管加入标本稀释液500ul。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。置37℃暗处反应15分钟。
4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板置37℃30分钟。
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。
3. 板条开封后剩余板条要再封好,
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。血浆、在第一管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul,第八管为空白对照。0pg/ml为横坐标,
8. 每孔加入100ul终止液混匀。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。1000、
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应GRO含量,血清、在450nm处测OD值,保持板条干燥。在坐标纸上作图,
7. 每孔加入底物工作液100ul,从第七管中吸出500ul弃去。第一管加标本稀释液900ul,将反应板充分混匀后置37℃60分钟。500、血浆至少作1:2稀释(取50ul,125、不能用于临床诊断!将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,
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5. 本试剂盒仅用于科研,
试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的GRO检测浓度小于16pg/ml。组织匀浆等尽早检测,形成免疫复合物连接在板上,用抗大鼠GRO/CINC-1/KC(CXCL1)单抗包被于酶标板上,不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。
2. 以标准品2000、细胞上清至少10倍稀释。画出标准曲线。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,再乘上稀释倍数。31. 2、移至第二管。
2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠GRO。